Zenix-C SEC色谱柱在胰岛素分析上的应用

背景介绍

不同来源的胰岛素样品分析

Zenix-C SEC-80色谱柱特点及订购信息

胰岛素-攻克糖尿病的有力武器

•胰岛素：其氨基酸序列在动物间具有高度的保守性。与人胰岛素相比，牛胰岛素中有3个氨基酸不同，而猪胰岛素中仅有1个氨基酸不同。分子量约5.8kD。

•现代胰岛素：通过重组DNA技术，利用大肠杆菌或酵母表达胰岛素及其衍生物。

•美国主要市场份额:礼来(22%),诺华诺德   (44%),赛诺菲(33%),其他(1%),预计到2018年全球可达到320亿美元的产值。

•国内胰岛素市场基本由诺华诺德、礼来、赛诺菲-安万特三巨头垄断，牢牢把持95%的市场份额；国内两家胰岛素公司：通化东宝，甘李药业仅能分享剩余不到5%的市场。

胰岛素种类

1 .Rapid-acting（超短效）: Humalog (Lispro), Novolog(Aspart), Apidra(Glulisine), for meals eaten at the sametime as the injection, used with long-acting type.

2 .Short-acting（短效）: Humulin (first recombinant Insulinproduct) or Novolin, Velosulin (for use in the insulinpump), 30-60 minutes within the eaten meal

3. Intermediate-acting（中效）: covers about half day orovernight, combined with rapid or short-acting.

4 .Long-acting（******）: covers about whole day, combinedwith rapid or short-acting.

5. Pre-mixed（预混）: combination of specific proportions ofintermediate-acting and short-acting insulin in one bottleor insulin pen (the numbers following the brand nameindicate the percentage of each type of insulin)

胰岛素药典要求

•    USP-limit of HMW proteins–  L20 packing, dihydropropane groups chemically bonded to poroussilica particles, 5 - 10 µm in diameter, 7.8 x 300 mm

–主要竞争对手:

•   Waters Insulin HMWP HPLC, 10 µm, 7.8 x 300mm, BEH125 SEC, 1.7 µm, 4.6 x300 mm and 4.6 x 150 mm

•   TSKgel Super SW2000 125 4 µm

•    EP

–  Column: 7.5 x 300 mm, hydrophilic silica gel for chromatography R (5-10 µm) with a pore size of 12-12.5 nm, of a grade suitable for theseparation of insulin monomer from dimer and polymers

•其他治疗糖尿病药物

–  Glucagon-like peptide 1（胰高血糖素样肽1） such as exenatide（艾塞那肽-礼来产品） where Zenix-C SEC-80 can be applied.

样品介绍

1.赖脯胰岛素（  Insulin Lispro，IL，商品名Humalog）为人胰岛素（human insulin，HI）赖脯换位的重组类似物，是美国礼来公司于1996年******在瑞士上市的。顾名思义，此种赖脯换位重组胰岛素类似物是指在HI分子结构中，其B链C-末端28位上的脯氨酸与29位上的赖氨酸相互换位而成的。除上述两个氨基酸换位以外，IL和HI的基本结构******相同。

2.重组人胰岛素（human  insulin，HI）购自Sigma。

3.低精蛋白锌胰岛素注射液

4.精蛋白生物合成人胰岛素注射液

5.精蛋白锌胰岛素注射液

6.胰岛素注射液（批次1206511和1303235）

Pore size effect-insulin Lispro

Column:

ZenixTM-C SEC-80 (3 µm, 80 Å, 7.8 x 300 mm),

ZenixTM-C SEC-150 (3 µm, 150 Å, 7.8 x 300 mm)

Mobile phase: 0.1% Arginine:Acetonitrile:Acetic acid (65:20:15), Flow rate: 1  mL/min,

Detector: UV 276 nm, Column temperature: 37℃  and 30℃,  Injection volume: 10 µL,

Sample: Insulin Lispro 3.75  mg/mL in phosphate containing m-cresol

体积大小的影响–赖脯胰岛素

色谱柱：
zenixtm-c sec-80（3µm，80Å，4.6 x 300毫米），流速：0.35 mL/min，注射量：5µL
zenixtm-c sec-80（3µm，80Å，7.8 x 300毫米），流速：1 mL/min，注射量：10µL
流动相：0.1%精氨酸：乙腈：乙酸（65:20:15），
检测器：紫外276 nm，柱温：30度，
示例：赖脯胰岛素3.75毫克/毫升的磷酸盐缓冲液中含有间甲酚，

柱温赖脯胰岛素

色谱柱柱：zenixtm-c sec-80（3µm，80Å，7.8 x 300毫米）
流动相：0.1%精氨酸：乙腈：乙酸（65:20:15），流速：0.5毫升/分钟，压力：38巴
检测器：紫外波长276 nm，柱温：37℃和30℃，注射量：10µL，
示例：赖脯胰岛素3.75毫克/毫升的含磷酸盐的间甲酚

流速的影响-赖脯胰岛素

柱：zenixtm-c sec-80（3µm，80Å，7.8 x 300毫米）
流动相：0.1%精氨酸：乙腈：乙酸（65:20:15），流速：0.5和1毫升/分钟
检测器：紫外波长276 nm，柱温：30℃，注射量：10µL，
示例：赖脯胰岛素3.75毫克/毫升的含磷酸盐的间甲酚

赖脯胰岛素和胰岛素的西格玛

柱：zenixtm-c sec-80（3µm，80Å，7.8 x 300毫米）
流动相：0.1%精氨酸：乙腈：乙酸（65:20:15），流速：1毫升/分钟，压力：103巴
检测器：紫外波长276 nm，柱温：30℃，注射量：10µL，
示例：赖脯胰岛素3.75毫克/毫升的含磷酸盐的间甲酚，西格玛胰岛素3.8毫克/毫升，在0.01 N HCl

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