解析生物样品的处理******技术（方法）

       生物样品通常情况都是是指植物的花、叶、茎、根、种子等，动物(包括人)的体液(如：尿、血、***是口水以及一些液体)、汗毛还有一些器官。欲分析的组分常有植物体内的微量元素、营养成分、农药残留等等；平常动物里面的一些元素、药物及代谢产物、一些关于这个的有关于这个的化合物、、由于生物样品及某些欲测组分的特殊性，生物样品的处理，除可使用上述的样品处理常用技术外，在采样、欲测组分的分离提取方面需采用一些特殊技术，成都摩尔科学仪器有限公司现对这些特殊技术作些简要介绍。

采    样

生物样品一般采自动、植物活体，采样方法与其他样品有所不同，一般采用注射器吸取，手术刀、剪切割等方法采集。采样时要注意采样时机，因为生物活体总在新陈代谢；采样后对采集的样品要立即加以处理，因为生物样品一般都有生物活性，如不立即加以处理，欲测组分***可能发生变化。如采集血样后要立即加抗血凝剂；采集好某些器官组织后要立即加一些防腐剂，或立即进行速冻或脱水处理。生物样品的采集******在无菌条件下进行。

细胞的破碎

当生物样品中的欲测组分（主要是各种多肽激素、各种酶以及各种基因工程的产物如干扰素、胰岛素、生长激素等等）存在于生物体细胞内及多细胞生物组织中时，需在分析测定它们之前将细胞和组织破碎，使这些欲测组分充分释放到溶液中去。不同的生物体，或同一生物体的不同组织，其细胞破碎的难易程度不一样，使用的方法也不******相同。如动物胰脏、肝脏、脑组织一般比较柔软，用普通的匀浆器研磨即可，肌肉及心脏组织较韧，需预先铰碎再作成匀浆。植物肉组织可用一般研磨方法，含纤维较多组织则必须在捣碎器内破碎或加砂研磨。许多微生物均具有坚韧的细胞壁，常用自溶、冷热交替、加砂研磨、超声波和加压处理等方法。总之，破碎细胞的目的***是为了破坏细胞的外壳，使细胞内含物有效地释放出来，获得有效的提取。

在用仪器分析生物样品中的一些小分子化合物及一些多肽类化合物时，蛋白质的存在，常常严重干扰分析，需要在制备仪器分析样品时将这些蛋白质除去，常用的除蛋白质方法有以下一些：（成都摩尔科学仪器有限公司）

1.   加热

当欲测组分热稳定性好时，可采用加热的方法将一些热变性蛋白沉淀。加热温度视欲测组分的热稳定性而定，通常可加热到90℃。蛋白沉淀后可用离心或过滤除去，这种方法***简单，但只能除去热变性蛋白。

盐析

利用不同蛋白质在高浓度的盐溶液中，溶解度不同程度的降低来沉淀除去蛋白质。在低盐浓度下蛋白质溶解度随着盐浓度升高而增加，称为盐溶作用。当盐浓度不断升高时，不同蛋白质的溶解度不同程度下降，并先后析出沉淀，称为盐析作用。盐析法的优点是对设备和条件要求低，安全，应用范围广泛，一般可在室温下操作。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。硫酸铵的盐析能力强，饱和液浓度大，溶解度受温度影响小，一般不会使蛋白质变性。缺点是缓冲能力差，pH值常在4.5～5.5间。

3.有机溶剂沉淀

蛋白质的沉淀与溶解，与溶剂的介电常数有关。降低溶液的介电常数，能增加蛋白质分子上不同电荷的引力，使其溶解度变小，同时还破坏蛋白质的水化膜而使蛋白质沉淀析出。乙醇和丙酮是***常用的有机溶剂，丙酮的介电常数小于乙醇，故沉淀的能力较强

4.等电点沉淀

       利用蛋白质在等电点时溶解度******，用酸、碱调pH，可使蛋白沉淀析出，但这时沉淀不******，可与有机溶剂沉淀法、盐析法联合使用。

5.膜分离

       膜分离技术包括超滤、反渗透析、电渗析、微孔过滤、气体渗析和超精密过滤等。利用膜分离技术可将欲测小分子化合物和大分子的蛋白质很好分离。

 6.凝胶层析

       利用分子大小不同的物质在流过凝胶固定相时的保留时间不同，大分子首先流出，小分子***后流出，可将欲测小分子化合物与大分子蛋白质分离。这时欲测小分子化合物的浓度被流动相所稀释，必要时还要进行浓缩。

7.柱层析

        用能吸附蛋白质的材料装填成小柱，使欲除蛋白质的样品流过小柱，样品中的蛋白质被柱填料吸附，欲测组份不被吸附，从小柱中流出。

8.高速离心

      高速离心是根据物质沉降系数、质量、浮力因子等不同，应用强大的离心力使物质分离、浓缩、提纯的方法，是生物样品制备中常用的分离方法之一。由于蛋白质等生物大分子，分子量大，在高速离心时将首先沉淀在离心管底部，不同分子量的蛋白质等生物大分子沉降速度不同，也可按分子量大小沉降在离心管的不同位置，这样***可以从离心管的不同位置取出样品进行分析。

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